Sandhoff 病（SD）由 HEXA/HEXB 基因缺陷引起，导致 Hex 酶缺失、GM2 神经节苷脂在溶酶体中蓄积。既往研究多采用脑内或脑脊液途径递送 AAV，但侵入性高。本研究改用静脉注射双顺反子 AAV9 载体，在症状前（约 1 月龄）治疗 SD 猫模型。核心矛盾在于：静脉递送需跨越血脑屏障，且双亚基共表达效率难以保证。
双顺反子设计：单载体的必要性
研究采用单一 AAV9 载体，中央为 CMV 增强子，两侧反向排列鸡 β-actin 启动子，分别驱动 Hex α 和 β 亚基 cDNA。这一设计的工艺逻辑清晰：若用两个独立载体，静脉注射后血流稀释使同一细胞被双载体共转导的概率极低。而 HexA（αβ）才是降解 GM2 的唯一活性形式，双亚基必须同细胞表达。
低剂量（5×10¹³ vg/kg）使生存期从 4.3 个月延长至 8.3 个月，高剂量（2×10¹⁴ vg/kg）达 12.4 个月。高剂量组未出现全身震颤，而低剂量组 4 只中 3 只延迟至 6.8 个月才出现。
组织分布与表达效率的工艺矛盾
载体分布数据显示，脑皮层浓度最高（0.050–9.658 vg/双倍体基因组），小脑、脑干和脊髓较低。但肝脏的载体拷贝数最高，HexA 活性却始终不超过正常的 0.09 倍。计算“比活性/载体基因组”比值后，脑、脊髓、骨骼肌和心脏的比值是肝脏的 23.0–139.8 倍。
这一差异指向工艺层面的关键问题：载体基因组丰度不等于功能蛋白产出。作者指出，该载体缺少 WPRE 元件，而 WPRE 在肝脏中可提升表达达 5.8 倍。此外，猫肝脏可能本身不利于某些 AAV 设计的表达。对工艺开发而言，组织特异性启动子或表达增强元件的取舍，直接影响单位载体的疗效产出。
短期纠正与长期衰减
16 周时，高剂量组 GFAP 染色、Iba1 形态和 Olig2 阳性细胞数均趋近正常。但长期随访（至人道终点）中，星形胶质细胞和小胶质细胞形态再次接近未治疗组，炎症仅被暂时逆转。
同时，载体拷贝数从短期到长期组几乎在所有 CNS 区块中下降，可能与转导细胞分裂丢失或免疫反应相关。所有治疗猫均产生 AAV9 抗体滴度（1:1000–1:256,000），这意味着再给药可能无效甚至危险。
对 AAV 制备与纯化工艺的启示
该研究的剂量依赖效应明确，但高剂量组仍未完全正常化各项指标。从工艺视角看，几个问题值得关注：其一，肝脏高摄取但低表达，提示载体在非靶组织的分布可能挤占有效剂量；其二，长期表达衰减与载体基因组丢失，涉及载体纯度、空壳率与转导效率的平衡；其三，抗体产生限制了重复给药，要求单次给药的载体质量尽可能高。
纯化工艺中，如何降低空壳比例、提高完整基因组包装效率，直接关系到单位 vg 的功能产出。而组织分布与表达效率的解耦现象，也提示工艺评价不能只看载体拷贝数，需结合功能蛋白活性。
一个开放问题：当静脉递送的载体在肝脏大量蓄积却不表达时，工艺端应优先优化组织靶向性，还是提高单细胞转导效率？
