GeneMedi的抗体药物偶联物(ADC)产品与数据

产品列表


案例研究:抗体药物偶联物(ADC)产品数据

抗体 有效载荷 质量控制
Ab-001 VCMMAE SDS-PAGE(还原和非还原)
人IgG1对照 DAR
Ab-002 细胞毒性实验

首先,我们使用了较高剂量的还原剂(TCEP)和小型毒性分子(vcmmae)以确保偶联成功。SDS-PAGE(还原DTT和非还原DTT)结果显示我们成功将MMAE连接到抗体上。此为偶联物制备。


1. 人IgG1-ADC:SDS-PAGE(还原)和SDS-PAGE(非还原)

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SDS-PAGE(还原DTT)1. Marker; 2. 人IgG1; 3. ADC标准品; 4-7: 我们的ADC样品; 8. Marker

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1. Marker; 2. 人IgG1; 3. ADC标准品; 4-7: 我们的ADC样品; 8. Marker

2. DAR检测

在本批次中,我们选择了5.4当量TCEP和10.8当量VCMMAE组进行DAR检测。我们样品的DAR与标准品几乎相同,但抗体完整性的结果不如标准品。



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图. LC-MS对ADC标准品的DAR检测。



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图. LC-MS对我们ADC样品的DAR检测。 在本项目开始时,为确保抗体能与有效载荷(MMAE)偶联,TCEP和MMAE的剂量较高。
然而,我们发现TCEP的剂量不能过高,否则对抗体结构的损伤会更严重。

3. 细胞毒性实验

下一步,我们进行了细胞毒性实验,观察ADC对293细胞的毒性作用。同时,考虑到ADC的储存和运输,我们将ADC冻干并比较了非冻干对ADC细胞毒性的影响。


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图。我们的ADC样本处理293T。

显然,与空白组相比,ADC对293细胞的生长具有显著的抑制作用。此外,冻干处理可以降低ADC对细胞生长的抑制作用。

结果表明,当还原剂TCEP的当量为0.4和1.5时,结果不具有规律性,这可能是由于二硫键的有限打开和小分子的有限偶联所致。然而,当TCEP的当量为3时,结果可以与之前的PTM-1-ADC(5.4t5.4v和5.4t10.8)相匹配。我们还用PTM-1-ADC处理了293-ko细胞系,显然,细胞死亡与ADC剂量之间没有规律性关系。



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